典型案例一：基因毒

● 項目名稱

山東省某中型藥企左卡尼汀品種中的4-氯3-羥基丁酸的含量研究

● 項目難點(diǎn)

待測雜質(zhì)和主成分的結(jié)構(gòu)相似，容易產(chǎn)生相同質(zhì)荷比的碎片離子，基質(zhì)干擾嚴(yán)重，并且質(zhì)譜響應(yīng)很低。(其他CRO未完成的研究)

名稱	結(jié)構(gòu)式
4-氯3-羥基丁酸
左卡尼汀

● 解決途徑及效果

嘗試氣質(zhì)與液質(zhì)等多種方法，通過調(diào)整質(zhì)譜參數(shù)并挑選特殊色譜柱，提高質(zhì)譜相應(yīng)，實現(xiàn)待測物質(zhì)與主成分的分離，順利獲得目標(biāo)質(zhì)荷比。比較了不同工藝樣品中雜質(zhì)含量，為后期客戶優(yōu)化工藝，提供了方向。

 

典型案例二：基因毒（同分異構(gòu)體）

● 項目名稱

山東省某中型藥企泊沙康唑起始物料中的兩種同分異構(gòu)體(鄰氯苯胺和間氯苯胺、鄰氯硝基苯和間氯硝基苯)的含量研究

● 項目難點(diǎn)

（1）互為同分異構(gòu)體，理化性質(zhì)接近，較難分離，還需考察對位雜質(zhì)的干擾。

（2）為發(fā)補(bǔ)項目，時間緊，合同周期僅12天。

● 解決途徑及效果

通過采用不同的儀器檢測手段，調(diào)整流動相、稀釋劑、挑選合適的色譜柱，實現(xiàn)同分異構(gòu)體雜質(zhì)、干擾雜質(zhì)的基線分離。在時間緊的情況下，仍提前完成任務(wù)(7天發(fā)送報告)，協(xié)助客戶順利完成發(fā)補(bǔ)。

 

典型案例三：基因毒

● 項目名稱

山東省某大型藥企頭孢呋辛酯中1-溴乙基乙酸酯和異氰酸氯磺酰酯的方法研究

● 項目難點(diǎn)

（1）待測雜質(zhì)性質(zhì)極其活潑，極易與水、醇、酮等發(fā)生反應(yīng)。

（2）待測雜質(zhì)和主成分結(jié)構(gòu)類似，且主成分受熱生成與待測雜質(zhì)結(jié)構(gòu)類似的物質(zhì)，導(dǎo)致回收率高。

（3）限度低，靈敏度要求高。

● 解決途徑及效果

嘗試不同檢測方式和衍生方式，順利開發(fā)兩種方法，專屬性、線性、回收率、穩(wěn)定性均良好，且響應(yīng)高，靈敏度可達(dá)0.5 ng/ml。

 

典型案例四：NDMA氣質(zhì)

● 項目名稱

山東省某大型藥企泊沙康唑中N-亞硝胺二甲胺(NDMA)和N-亞硝胺二乙胺(NDEA)的方法研究

● 項目難點(diǎn)

（1）待測供試品不易溶于水，導(dǎo)致檢測限度難達(dá)到。

（2）NDEA限度低，對儀器靈敏度要求高。

● 解決途徑及效果

（1）選用合適溶劑溶解供試品。

（2）改變進(jìn)樣參數(shù)設(shè)置，增加進(jìn)樣體積，響應(yīng)提高，靈敏度可達(dá)0.1 ng/ml。

 

典型案例五：NDMA液質(zhì)

● 項目名稱

山東省某大型藥企鹽酸二甲雙胍緩釋片中N-亞硝胺二甲胺(NDMA)的方法研究

● 項目難點(diǎn)

（1）制劑中一種輔料微溶于現(xiàn)有的預(yù)處理方法中的提取溶劑，導(dǎo)致進(jìn)樣后嚴(yán)重污染儀器。

（2）NDMA限度低，對儀器靈敏度要求高。

● 解決途徑及效果

（1）通過文獻(xiàn)查閱及試驗找出是哪種輔料對方法有影響，調(diào)整提取溶劑，解決污染問題

（2）根據(jù)儀器特性，調(diào)整電壓、源溫度，氣流量等參數(shù)，提高靈敏度。

 

典型案例六：基因毒

● 項目名稱

山東省某藥物研發(fā)公司：美阿沙坦鉀中8種亞硝胺（NDMA、NDEA、NDIPA、NEIPA、NDBA、NDPA、NMPA、NMBA）基因毒雜質(zhì)研究

● 項目難點(diǎn)

（1）亞硝胺種類多、限度低、雜質(zhì)響應(yīng)大小不一，響應(yīng)低的難以達(dá)到靈敏度要求。

（2）個別亞硝胺雜質(zhì)受主成分干擾，影響雜質(zhì)出峰和回收率。

● 解決途徑及效果

（1）采用GC-MS/MS檢測七種亞硝胺，采用液液萃取的供試品處理方式排除供試品對雜質(zhì)的干擾，通過優(yōu)化進(jìn)樣口溫度、色譜柱初始溫度、高壓進(jìn)樣方式、色譜柱流量等參數(shù)極大提高了各雜質(zhì)的響應(yīng)，靈敏度最低可做到0.3~0.5ng/ml。

（2）采用LC-MS/MS檢測NMBA，由于NMBA不易揮發(fā)無法使用氣質(zhì)檢測，故采用液質(zhì)檢測。通過選擇一種合適的溶解供試品的溶劑避免了溶劑對NMBA的影響（如堿會與NMBA發(fā)生中和反應(yīng)），方法靈敏度可達(dá)到0.12ng/ml，線性、靈敏度和準(zhǔn)確度良好。

 

典型案例七：基因毒

● 項目名稱

山東省某藥企富馬酸伏諾拉生中19種基因毒雜質(zhì)

● 雜質(zhì)種類

 

 

 

● 項目難點(diǎn)

（1）雜質(zhì)種類多，性質(zhì)不統(tǒng)一，需要分成多個方法進(jìn)行。

（2）含有多種同分異構(gòu)體雜質(zhì)，性質(zhì)接近，分子量相同，較難分離，易干擾彼此檢測。

（3）部分雜質(zhì)與主成分有類似結(jié)構(gòu)，在質(zhì)譜中容易裂成相同的碎片，導(dǎo)致待測雜質(zhì)受主成分的干擾。

（4）部分雜質(zhì)性質(zhì)極其活潑，易與水、醇、酮等發(fā)生反應(yīng)，無法直接測定。

（5）部分雜質(zhì)出峰與主成分出峰時間接近，切閥后主成分容易進(jìn)入質(zhì)譜導(dǎo)致基線升高，待測雜質(zhì)響應(yīng)降低、回收率不達(dá)標(biāo)。

● 解決途徑及效果

（1）根據(jù)各雜質(zhì)的結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)如溶解性、沸點(diǎn)等及限度要求選擇相應(yīng)的分析方法，如揮發(fā)性的選用氣相或氣質(zhì)、不揮發(fā)的選用液相、液質(zhì)，最終用9種分析方法完成了19個雜質(zhì)的方法開發(fā)、驗證。方法靈敏度高，檢測限最低可做到0.2ng/ml。各雜質(zhì)線性良好，回收率均在80%~120%范圍內(nèi)。

（2）對于較難分離的同分異構(gòu)體通過調(diào)整流動相組分和比例、改變稀釋劑、挑選合適的色譜柱等手段，實現(xiàn)分離并排除干擾。

（3）對于性質(zhì)活潑的酰氯類雜質(zhì)通過與醇衍生成酯類化合物，然后與其他酯類雜質(zhì)一起檢測，衍生后的化合物其靈敏度較高，穩(wěn)定性良好。

（4）對于易受主成分干擾的雜質(zhì)，通過萃取、溶解后再析出等方式將主成分除去，排除主成分的干擾；或者通過選擇特殊的色譜柱、調(diào)節(jié)流動相的pH、選擇不同酸堿度的溶劑等方式將主成分和雜質(zhì)更好地分離，然后再通過設(shè)置切閥時間將主成分切入廢液以避免主成分干擾。

 

典型案例八：基因毒雜質(zhì)

● 項目名稱

江蘇省某藥企：奈瑪特韋中4-二甲氨基吡啶（DMAP）、2-羥基吡啶-N-氮氧化物（HOPO）、1-乙基-2-（3-二甲胺丙基）碳二亞胺鹽酸鹽（EDCI）3種基因毒雜質(zhì)研究

● 雜質(zhì)結(jié)構(gòu)式

● 項目難點(diǎn)

（1）HOPO和DMAP有類似的結(jié)構(gòu)碎片吡啶，容易彼此干擾。

（2）個別雜質(zhì)受供試品中主成分或其他輔料成分的干擾，在雜質(zhì)出峰處基線上升影響雜質(zhì)，進(jìn)而影響回收率。

● 解決途徑及效果

（1）選用合適溶劑先溶解供試品，然后再選擇合適的溶劑采用萃取的方式將供試品和雜質(zhì)分開，排除供試品的干擾。

（2）有相同碎片離子的雜質(zhì)分別采用不同的儀器（質(zhì)譜和色譜）進(jìn)行檢測，避免干擾。

 

典型案例九：基因毒雜質(zhì)

● 項目名稱

山東省某大型藥企：羅替高汀中對甲苯磺酸甲酯、對甲苯磺酸乙酯、對甲苯磺酰氯、2-（噻吩-2-基）乙基對甲苯磺酸酯和對甲苯磺酸5種基因毒雜質(zhì)研究。

● 雜質(zhì)結(jié)構(gòu)式

● 項目難點(diǎn)

（1）雜質(zhì)種類多、結(jié)構(gòu)類似、性質(zhì)不穩(wěn)定，彼此易干擾。

（2）酰氯類雜質(zhì)性質(zhì)活潑、不穩(wěn)定，易與水、醇等發(fā)生反應(yīng)，無法直接測定。

（3）對甲苯磺酰氯與水反應(yīng)生成對甲苯磺酸，易干擾對甲苯磺酸雜質(zhì)的檢測。

● 解決途徑及效果

（1）5個雜質(zhì)分2套方法進(jìn)行，避免了部分雜質(zhì)的互相干擾。

（2）將對甲苯磺酰氯衍生成對甲苯磺酸酯類，與其余3種對甲苯磺酸酯同時測定。通過選擇色譜柱、調(diào)整流動相洗脫程序等參數(shù)將4種磺酸酯類雜質(zhì)分離，方法靈敏度好、專屬性高，檢測限可做到限度的10%以下。

（3）將對甲苯磺酸雜質(zhì)單獨(dú)檢測，避免了磺酰氯雜質(zhì)對其干擾。同時通過篩選色譜柱、調(diào)整流動相中緩沖鹽的濃度，延遲雜質(zhì)出峰時間，避免了雜質(zhì)不保留的情況，同時延長了溶液穩(wěn)定性維持時間。

 

典型案例十：強(qiáng)基質(zhì)干擾下的基因毒性雜質(zhì)研究

● 項目名稱

寧夏某中型藥企紅霉素品種中的NDMA和NDEA的含量研究

● 項目難點(diǎn)

NDMA和NDEA限度較低，對儀器靈敏度要求較高。供試品紅霉素為大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，與雜質(zhì)極性相似，溶解行為極為相似，均易溶于甲醇、二氯甲烷等有機(jī)溶劑，且濃度較大，需經(jīng)過合適的前處理再進(jìn)樣檢測，否則干擾檢測、污染儀器，還需滿足加標(biāo)回收要求。

● 解決途徑及效果

首先將儀器靈敏度調(diào)整到最佳狀態(tài)，優(yōu)化色譜條件。采用特殊樣品制備方式，有效分離了NDMA、NDEA和紅霉素，排除了樣品干擾，解決了樣品處理及加標(biāo)回收的難點(diǎn)問題。

 

典型案例十一：嘌呤類亞硝化物雜質(zhì)研究

● 項目名稱

湖北及江西兩個中性藥企鳥嘌呤和鳥嘌呤三氨衍生物中的嘌呤類亞硝化物方法研究

● 項目難點(diǎn)

（1）限度低至0.375ppm。

（2）雜質(zhì)與主成分色譜分離困難。

（3）主成分和雜質(zhì)在各種溶劑中溶解度極低，可供選擇的溶劑有限。

（4）基質(zhì)干擾，回收率偏低。

（5）樣品穩(wěn)定性差，容易降解，使雜質(zhì)含量升高。

● 解決途徑及效果

優(yōu)化色譜條件實現(xiàn)有效分離；優(yōu)化質(zhì)譜條件，提高雜質(zhì)響應(yīng)；嘗試多種樣品前處理流程，解決回收率和穩(wěn)定性難題。

 

典型案例十二：羥基川穹嗪氮氧化物雜質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)品制備

● 項目名稱

河南省某知名藥企磷酸川芎嗪質(zhì)量研究

● 項目難點(diǎn)

（1）常規(guī)合成方法較難，嘗試了多個條件都未得到目標(biāo)物。

（2）采取強(qiáng)制降解，隨著樣品破壞時間延長目標(biāo)物也會降解掉。

（3）最終確定目標(biāo)物在3%-5%時破壞最佳條件。

● 解決途徑及效果

合成實驗嘗試四個條件不成，然后采用催化劑催化，實驗6個溫度條件下，雙氧水破壞實驗，目標(biāo)物最高5%，然后用高壓制備液相的方法制備純化。

 

典型案例十三：他達(dá)拉非片堿破壞雜質(zhì)

● 項目名稱

山東省某知名藥企他達(dá)拉非雜質(zhì)制備

● 項目難點(diǎn)

（1）項目時間緊。

（2）破壞樣品目標(biāo)物含量1%，含量少，制備困難。

（3）由于輔料原因制劑樣品破壞完后，過濾困難。

● 解決途徑及效果

樣品前處理后，溶液渾濁，直接過濾，很快就把濾膜糊住，增加離心，取上清液，再通過濾膜過濾，才解決了前處理問題，進(jìn)樣時樣品不析出；目標(biāo)物含量較少，由于時間緊迫需要增大進(jìn)樣量進(jìn)行制備。

 

典型案例十四：元素雜質(zhì)

● 項目名稱

某大型藥企某大容量注射液中元素雜質(zhì)的分析方法研究

● 項目難點(diǎn)

（1）大容量注射液日用量按2L計，目標(biāo)元素的限度較低。

（2）注射液中含鹽量、含碳量較高，樣品基質(zhì)效應(yīng)高，樣品需稀釋，導(dǎo)致上機(jī)目標(biāo)元素限度更低。

（3）調(diào)節(jié)儀器稀釋倍數(shù)，會使得目標(biāo)元素響應(yīng)降低，在該水平上，少許波動都會對數(shù)值產(chǎn)生較大影響。

● 解決途徑及效果

（1）盡量減小樣品的稀釋倍數(shù)，通過調(diào)整儀器參數(shù)，減少樣品基質(zhì)效應(yīng)。

（2）優(yōu)化樣品前處理流程，提高檢測靈敏度。